Alttiimmin HPLC-vikoja ja ratkaisuja

Korkean tarkkuuden instrumenttina HPLC voi helposti johtaa kiusallisiin pieniin ongelmiin, jos sitä ei käytetä oikein käytön aikana.Yksi yleisimmistä ongelmista on sarakkeen pakkausongelma.Viallisen kromatografin vianmääritys nopeasti.HPLC-järjestelmä koostuu pääasiassa säiliöpullosta, pumpusta, injektorista, kolonnista, kolonnin lämpötilakammiosta, detektorista ja tietojenkäsittelyjärjestelmästä.Koko järjestelmässä pilarit, pumput ja ilmaisimet ovat avainkomponentteja ja tärkeimmät paikat, jotka ovat alttiita ongelmille.

Kolonnin paineen avain on alue, johon on kiinnitettävä erityistä huomiota HPLC:tä käytettäessä.Kolonnin paineen stabiilisuus liittyy läheisesti kromatografisen piikin muotoon, kolonnin tehokkuuteen, erotustehokkuuteen ja retentioaikaan.Kolonnin paineen stabiilisuus ei tarkoita, että painearvo on stabiili stabiilissa arvossa, vaan pikemminkin sitä, että paineen vaihtelualue on välillä 345 kPa tai 50 PSI (mahdollistaa gradienttieluution käytön, kun kolonnin paine on vakaa ja hitaasti muuttuva).Liian korkea tai liian matala paine on kolonnin paineongelma.

Alttiimmin HPLC-vikoja ja ratkaisuja

1, korkea paine on yleisin ongelma HPLC:n käytössä.Tämä tarkoittaa äkillistä paineen nousua.Yleensä syyt ovat seuraavat: (1) Yleensä tämä johtuu virtauskanavan tukkeutumisesta.Tässä vaiheessa meidän pitäisi tarkastella sitä palasittain.a.Katkaise ensin tyhjiöpumpun tuloaukko.Tässä vaiheessa PEEK-putki täytettiin nesteellä niin, että PEEK-putki oli pienempi kuin liuotinpullo, jotta näkisi, tippuiko neste mielellään.Jos neste ei tipu tai tippu hitaasti, liuotinsuodattimen pää on tukossa.Hoito: Liota 30 % typpihapossa puoli tuntia ja huuhtele ultrapuhtaalla vedellä.Jos nestettä tippuu satunnaisesti, liuotinsuodattimen pää on normaali ja sitä tarkistetaan;b.Avaa tyhjennysventtiili niin, että liikkuva faasi ei kulje kolonnin läpi, ja jos paine ei laske merkittävästi, suodattimen valkoinen pää on tukossa.Käsittely: Suodatetut valkopäät poistettiin ja sonikoitiin 10 % isopropanolilla puoli tuntia.Olettaen, että paine putoaa alle 100 PSI:n, suodatettu valkoinen pää on normaali ja sitä tarkistetaan;c.Poista kolonnin ulostulopää, jos paine ei laske, kolonni on tukossa.Hoito: Jos kyseessä on puskurisuolan tukos, huuhtele 95 %, kunnes paine on normaali.Jos tukos johtuu jostakin paremmin säilyneestä materiaalista, tulee käyttää nykyistä liikkuvaa faasia voimakkaampaa virtausta rynnätä kohti normaalipainetta.Jos pitkäkestoinen puhdistuspaine ei laske yllä olevan menetelmän mukaisesti, voidaan kolonnin tulo- ja poistoaukon katsoa päinvastoin kytketyksi laitteeseen ja kolonni voidaan puhdistaa liikkuvalla faasilla.Tällä hetkellä, jos kolonnin painetta ei vieläkään lasketa, kolonnin sisääntuloseulalevy voidaan vaihtaa vain, mutta kun toiminta ei ole hyvä, on helppo johtaa kolonnin vaikutuksen vähenemiseen, joten yritä käyttää vähemmän.Vaikeissa ongelmissa voidaan harkita kolonnin vaihtamista.

(2) Väärä virtausnopeusasetus: Oikea virtausnopeus voidaan nollata.

(3) Virheellinen virtaussuhde: virtausten eri suhteiden viskositeettiindeksi on erilainen ja korkeamman viskositeetin virtauksen vastaava järjestelmäpaine on myös suurempi.Jos mahdollista, alhaisemman viskositeetin liuottimet voidaan vaihtaa tai asettaa uudelleen ja valmistaa.

(4) Järjestelmän paineen nollapoikkeama: säädä nestetason anturin nolla.

2, liian alhainen paine (1) johtuu yleensä järjestelmän vuodosta.Toimenpiteet: Etsi jokainen liitäntä, erityisesti liitäntä kolonnin molemmista päistä, ja kiristä vuotoalue.Irrota tolppa ja kiristä tai vuoraa PTFE-kalvo sopivalla voimalla.

(2) Kaasu tulee pumppuun, mutta paine on yleensä epävakaa tällä hetkellä, korkea ja matala.Vakavammin pumppu ei pysty imemään nestettä.Hoitomenetelmä: avaa puhdistusventtiili ja puhdista virtausnopeudella 3–5 ml/min.Jos ei, ilmakuplat imettiin poistoventtiilistä käyttämällä erityistä neulaputkea.

(3) Ei liikkuvan vaiheen ulosvirtausta: tarkista, onko säiliöpullossa liikkuvaa vaihetta, onko pesuallas upotettu liikkuvaan vaiheeseen ja onko pumppu käynnissä.

(4) Vertailuventtiili ei ole kiinni: referenssiventtiili suljetaan hidastuksen jälkeen.Yleensä se laskee 0,1:een.~ 0,2 ml/min referenssiventtiilin sulkemisen jälkeen.

Yhteenveto:

Tässä artikkelissa analysoidaan vain yleisiä nestekromatografian ongelmia.Käytännön sovelluksessamme kohtaamme tietysti enemmän muita ongelmia.Viankäsittelyssä tulee noudattaa seuraavia periaatteita: muuta vain yhtä tekijää kerrallaan määrittääksesi hypoteettisen tekijän ja ongelman välisen suhteen;Yleensä kun vaihdat osia vianmääritystä varten, meidän tulee kiinnittää huomiota purettujen ehjien osien asettamiseen takaisin paikoilleen jätteen estämiseksi;Hyvän tallennustavan muodostaminen on avain viankäsittelyn onnistumiseen.Yhteenvetona voidaan todeta, että HPLC:tä käytettäessä on tärkeää kiinnittää huomiota näytteen esikäsittelyyn sekä laitteiden oikeaan käyttöön ja huoltoon.