Rekombinanttiproteiiniantigeeneillä on usein useita erilaisia epitooppeja, joista osa on sekvenssiepitooppeja ja osa rakenteellisia epitooppeja.Polyklonaaliset vasta-aineet, jotka on saatu immunisoimalla eläimiä denaturoiduilla antigeeneillä, ovat vasta-aineiden seoksia, jotka ovat spesifisiä yksittäisille epitoopeille, ja niitä voidaan käyttää yleisesti luonnollisten rakenteiden tai denaturoitujen kohdeproteiinien havaitsemiseen.Sivuhyöty denaturoitujen proteiinien käytöstä immunogeeneinä on, että denaturoidut proteiinit ovat yleensä immunogeenisempiä ja voivat stimuloida vahvaa immuunivastetta eläimissä.
Escherichia colin ilmentämisjärjestelmä valitaan yleensä antigeenitarkoituksiin, koska se on ajan ja rahan kannalta kallein järjestelmä.Kohdeproteiinin ilmentymisen mahdollisuuden ja puhdistuksen mukavuuden parantamiseksi joskus vain pieni fragmentti kohdeproteiinista, kuten spesifinen domeeni, ekspressoituu.
Proteiinien kolmiulotteinen rakenne
Proteiinin erityinen alue
Jos vasta-aineen valmistuksen tarkoitus on pelkästään wb-detektio, on taloudellista ja nopeaa käyttää synteettistä pientä peptidiä antigeeninä, mutta peptidisegmentin epäasianmukaisen valinnan vuoksi on olemassa heikon immunogeenisyyden tai ei-regeenisyyden riski.Koska vasta-aineen valmistus vaatii pitkän ajanjakson, valitaan usein kaksi tai kolme erilaista peptidisegmenttiä vasta-aineiden valmistamiseksi käyttämällä polypeptidiantigeeniä kokeen onnistumisasteen varmistamiseksi.
Polypeptidiantigeenin puhtauden immunisaatiota varten vaaditaan olevan yli 80 %.Vaikka korkeammalla puhtaudella voidaan teoriassa saada vasta-aineita, joilla on parempi spesifisyys, käytännössä eläimet tuottavat aina suuren määrän epäspesifisiä vasta-aineita, mikä peittää antigeenin puhtauden edut.
Lisäksi vasta-aineiden valmistus pienistä peptideistä on silloitettava sopivaan kantaja-antigeeniin sen immunogeenisyyden parantamiseksi.Kaksi yleistä antigeenikantajaa ovat KLH ja BSA.
Postitusaika: 23.3.2023