Biologisessa tutkimuksessa käytetään yleensä polypeptidejä, joilla on pitkä sekvenssi.Peptideille, joiden sekvenssissä on yli 60 aminohappoa, niiden saamiseksi käytetään yleensä geeniekspressiota ja SDS-PAGE:ta.Tämä menetelmä vie kuitenkin kauan ja lopputuotteen erotusvaikutus ei ole hyvä.
Pitkän peptidisynteesin haasteita ja ratkaisuja
Pitkien peptidien synteesissä kohtaamme aina ongelman, eli kondensaatioreaktion steerinen este kasvaa synteesin sekvenssin kasvaessa ja reaktioaikaa on säädettävä niin, että reaktio on täydellinen.Kuitenkin mitä pidempi reaktioaika on, sitä enemmän sivuvaikutuksia syntyy ja osa kohdepeptidistä muodostuu.Tällaiset jäännökset – puutteelliset peptidiketjut ovat keskeisiä epäpuhtauksia, joita syntyy pitkässä peptidisynteesissä.Siksi pitkän peptidin synteesissä avainongelma, joka meidän on voitettava, on tutkia korkealaatuisia reaktio-olosuhteita ja reaktiomenetelmiä, jotta aminohappokondensaatioreaktiosta saadaan kattavampi ja täydellisempi.Lisäksi lyhennä reaktioaikaa, koska mitä pidempi reaktioaika, sitä enemmän hallitsemattomia sivureaktioita, sitä monimutkaisempia sivutuotteita.Siksi seuraavat kolme kohtaa on tiivistetty:
Mikroaaltosynteesiä voidaan käyttää: Joillekin synteesiprosessissa kohdatuille aminohapoille, joita ei ole helppo integroida, voidaan käyttää mikroaaltosynteesiä.Tällä menetelmällä on merkittäviä tuloksia, ja se lyhentää huomattavasti reaktioaikaa ja vähentää kahden keskeisen sivutuotteen muodostumista.
Fragmenttisynteesimenetelmää voidaan käyttää: Kun joitain peptidejä on vaikea syntetisoida yleisillä synteesimenetelmillä ja niitä ei ole helppo puhdistaa, voimme omaksua useiden aminohappojen koko kondensaation tietyssä peptidin segmentissä peptidiketjuun kokonaisuutena.Tällä menetelmällä voidaan myös ratkaista monia synteesin ongelmia.
Asyylihydratsidisynteesiä voidaan käyttää: peptidien asyylihydratsidisynteesi on menetelmä N-terminaalisen Cys-peptidin ja C-terminaalisen polypeptidin hydratsidin kiinteän faasin synteesiin kemiallinen selektiivinen reaktio amidisidosten muodostumisen välillä peptidisidosmenetelmän saavuttamiseksi.Perustuen Cys:n asemaan peptidiketjussa, tämä menetelmä jakaa koko peptidiketjun useiksi sekvensseiksi ja syntetisoi ne vastaavasti.Lopuksi kohdepeptidi saadaan nestefaasin kondensaatioreaktiolla.Tämä menetelmä ei ainoastaan lyhennä suuresti pitkän peptidin synteesiaikaa, vaan myös lisää merkittävästi lopputuotteen puhtautta.
Pitkä peptidipuhdistus
Pitkien peptidien erikoisuus johtaa väistämättä raakapeptidien monimutkaisiin komponentteihin.Siksi on myös haaste puhdistaa pitkiä peptidejä HPLC:llä.Amyloidi sarjan polypeptidin puhdistusprosessi, joka imee paljon kokemusta ja käytetään menestyksekkäästi pitkän peptidin puhdistuksessa.Ottamalla käyttöön uusia laitteita, sekoittamalla useita puhdistusjärjestelmiä, toistuvasti erottelemalla ja muilla kokemusmenetelmillä pitkän peptidin puhdistuksen onnistumisaste parani huomattavasti.
Postitusaika: 18.4.2023